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人VHL基因真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞生长的抑制被引量：2: 2014年; 目的:构建人抑癌基因VHL的真核表达载体,并验证其对肿瘤细胞生长的影响。方法:采用PCR技术从人乳腺文库中扩增人VHL基因,将其克隆到p XJ-40-myc载体中,酶切和测序验证后转染人胚肾293T细胞,通过蛋白免疫印迹鉴定其表达;转染人乳腺癌ZR75-1细胞和肝癌Hep G2细胞,通过CCK8法测定细胞生长曲线。结果:从人乳腺文库中扩增得到约650 bp的DNA片段,并克隆至p XJ-40-myc载体上,且测序与目的序列完全一致;转染人胚肾293T细胞后,蛋白免疫印迹检测到相对分子质量为26×103的目的基因表达产物;细胞生长曲线显示,转染myc-VHL的乳腺癌、肝癌细胞较空载体细胞生长慢。结论:构建了myc-VHL真核表达载体,myc-VHL抑制癌细胞生长,为进一步研究VHL在肿瘤发生发展中的功能奠定了基础。; 李玲王婷梁迎春张立冯滢滢周丽英冀全博郭靖徐小洁叶棋浓; 关键词：克隆真核表达肿瘤细胞

带myc标签的人HER2基因真核表达载体的构建及其生物学功能被引量：4: 2013年; 目的构建人类HER2基因的真核表达载体,并对其促进乳腺癌细胞增殖效果及靶向药物敏感性进行验证。方法采用PCR技术扩增出HER2基因,将其插入到pXJ-40-myc载体中,酶切和测序验证后,将其转染到乳腺癌ZR75-1细胞中,Western blot法检测其表达情况;CCK8法测定细胞生长曲线;加入靶向药物曲妥珠单克隆抗体后,观察转染细胞对药物的反应。结果酶切和测序结果证实表达质粒构建成功;Western blot法结果显示,myc-HER2蛋白在转染细胞中成功表达;转染myc-HER2的乳腺癌细胞较空载体细胞生长较快;加入曲妥珠单克隆抗体后,转染myc-HER2的细胞生长明显受到抑制。结论成功构建了带myc标签的HER2基因真核表达载体,为进一步研究曲妥珠单抗的耐药奠定了实验基础。; 宋金洁王涛徐小洁符静刘家宏叶棋浓江泽飞; 关键词：MYC

Role of F-18 FDG PET/CT imaging in the diagnosis of paraneoplastic neurological syndromes: 2014年; Paraneoplastic neurological syndromes(PNS) is a series of rare neurologic disorders which happen with an underlying malignancy. It has various clinical symptoms proceding to the diagnosis of tumors. Although the abnormality of anti-neuronal antibodies is suggestive of PNS and tumors, there exist many false positive and false negative cases. The diagnosis of PNS is usually a challenge in clinic. Positron emission tomography/computed tomography(PET/CT) imaging is an anatomical and functional fusion imaging method, which provides the whole-body information by single scan. Fluorodeoxyglucose(FDG) PET/CT imaging can not only detect potential malignant lesions in the whole body, but also assess functional abnormality in the brain. In this review, the mechanism, clinical manifestation, diagnostic procedure and the recent progress of the utility of FDG PET/CT in PNS are introduced respectively.; Lei KangXiaojie XuHongwei SunRongfu Wang

人酪蛋白激酶1激酶区真核表达载体的构建及鉴定: 2016年; 目的:构建带Flag标签的酪蛋白激酶1α(CK1α)激酶区截短突变体CK1α(1-285aa)的真核表达载体,获得其表达产物,并验证该激酶区与已知相互作用蛋白Myc-Cdc25A之间的相互作用。方法:用PCR技术从人全长CK1α真核表达载体中扩增CK1α(1-285aa),将其克隆到Flag载体中,将重组质粒转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测其在人293T细胞中的表达情况,免疫共沉淀分别检测Flag-CK1α全长、Flag-CK1α(1-285aa)与Myc-Cdc25A的相互作用。结果:双酶切和基因测序鉴定显示Flag-CK1α(1-285aa)真核表达载体克隆构建成功;Western印迹结果表明Flag-CK1α(1-285aa)转染人胚肾细胞293T细胞后获得表达;免疫共沉淀结果显示Flag-CK1α全长、Flag-CK1α(1-285aa)与Myc-Cdc25A在蛋白质水平上具有相互作用,证实其具有生物学活性。结论:构建了Flag-CK1α(1-285aa)的真核表达载体,为进一步探讨Flag-CK1α激酶区对细胞信号通路的调节作用奠定了实验基础。; 尤文叶褚春雨徐小洁梁迎春洪甜黄俊韩笑叶棋浓杨俊兰李瑛; 关键词：真核表达 CDC25A

人自噬相关蛋白ATG7的原核表达及纯化鉴定被引量：1: 2016年; 目的:原核表达并纯化自噬相关蛋白ATG7,初步鉴定其生物学活性。方法:利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人ATG7基因的编码序列,插入载体p ET-28a(+)得到重组质粒,经Bam HⅠ和NotⅠ双酶切鉴定后转化大肠杆菌Rossate菌株进行小量诱导,纯化融合蛋白His-ATG7,通过Western印迹和SDS-PAGE检测融合蛋白的纯化效果。结果:用PCR技术从人乳腺文库中扩增得到约2031 bp的目的片段,插入载体p ET-28a(+)后构建出His-ATG7重组质粒,并经酶切鉴定及测序证实无误;转化大肠杆菌Rossate并进行小量诱导,纯化后SDS-PAGE检测显示获得相对分子质量约为78×103的融合蛋白。结论:纯化得到原核系统表达的His-ATG7融合蛋白,为后续研究ATG7在自噬中的作用机制奠定了实验基础。; 晋帅洪甜张珂马永富徐小洁禇健易绍琼叶棋浓刘阳; 关键词：原核表达纯化自噬

带myc标签的人造血相关PBX相互作用蛋白真核表达载体的构建及其功能研究被引量：1: 2014年; 目的:构建带myc标签的造血相关PBX相互作用蛋白(HPIP)的真核表达载体,获得myc-HPIP融合蛋白,并对其生物学功能进行初步检测。方法:以本实验室保存的pcDNA3.0-HPIP质粒为模板,采用PCR技术扩增HPIP编码序列,将其插入pXJ-40-myc载体,通过Western印迹检测表达情况;将重组质粒与空载体分别转染人肝癌HepG2细胞,通过Western印迹检测其对AKT、ERK信号通路中AKT、ERK磷酸化水平的影响。结果:双酶切和测序结果表明myc-HPIP真核表达质粒构建成功,转染HepG2细胞后表达了myc-HPIP融合蛋白;Western印迹证明myc-HPIP可升高AKT、ERK的磷酸化水平。结论:构建了带myc标签的人HPIP真核表达载体,为进一步研究HPIP在肿瘤发生发展中的功能奠定了基础。; 李玲闫志风蒋昊冯滢滢冀全博黄蓉周丽英王鹏徐小洁叶棋浓; 关键词：真核表达

热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白(CHIP)对HER2的降解作用被引量：2: 2014年; 热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白（carboxyl-terminus of the Hsp70 interacting protein，CHIP）是Ballinger等发现的同时具有辅助伴侣分子和E3泛素连接酶活性的特殊蛋白分子。作为辅助伴侣分子，它与Hsp90和Hsc／Hsp70相互作用，调节Hsp介导的蛋白质的异常折叠；而作为E3泛素连接酶，通过泛素化-蛋白酶体途径参与许多疾病相关蛋白的降解过程。; 郭芸菲王涛徐小洁宋金洁王宣王子政叶棋浓江泽飞; 关键词：HER-2

BRCA1基因真核表达载体的构建及其功能验证: 2014年; 目的构建人乳腺癌易感基因BRCA1的真核表达载体,并对其生物学功能进行初步检测。方法利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人BRCA1基因,将其克隆到p XJ-40-myc载体中,酶切和测序验证后转染到乳腺癌ZR75-1细胞中,通过Western印迹检测其表达情况,并用CCK8法测定细胞生长曲线。结果从人乳腺文库中扩增获得大小为5600 bp的DNA片段,并成功克隆至p XJ-40-myc载体上,经测序与目的序列完全一致;转染乳腺癌ZR75-1细胞后目的基因成功表达;细胞生长曲线结果显示,转染myc-BRCA1的乳腺癌细胞较空载体细胞生长缓慢;划痕实验说明,转染myc-BRCA1的乳腺癌细胞较空载体细胞迁袭缓慢。结论成功构建了带myc标签的人BRCA1真核表达载体,为进一步研究BRCA1在乳腺癌发生发展中的功能奠定了基础。; 李玲梁迎春王涛冀全博周丽英黄蓉郭靖徐小洁叶棋浓; 关键词：克隆真核表达乳腺肿瘤

人Six1基因真核表达载体的构建及其生物学功能研究被引量：2: 2014年; 目的:构建带myc标签的Six1基因的真核表达载体,获得myc-Six1融合蛋白,并对其生物学功能进行初步检测。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增Six1编码序列,将其插入pXJ-40-myc载体,Western印迹检测其在人293T细胞中的表达;将重组质粒与空载体分别转染乳腺癌细胞ZR75-1,通过qRT-PCR检测细胞中VEGF-C在mRNA水平的变化。结果:双酶切和测序结果表明myc-Six1真核表达质粒构建成功;Western印迹证明转染293T细胞后成功表达;qRT-PCR结果表明myc-Six1可升高乳腺癌细胞ZR75-1的VEGF-C转录水平。结论:构建了带myc标签的Six1表达载体,为进一步研究Six1在乳腺癌转移中的作用奠定了基础。; 李淑月徐小洁韩聚强王涛符静李玲冀全博王宣杨国锋叶棋浓; 关键词：真核表达生物学功能

细胞自噬与肿瘤被引量：19: 2013年; 自噬是广泛存在于真核细胞内的一种细胞分解自身构成成分的生命现象.细胞内的双层膜结构与溶酶体结合后其内包裹的受损、变形或衰老细胞器蛋白质等被水解酶类降解.细胞自噬具有多种生理功能,生命体借此维持蛋白质代谢平衡及细胞环境稳定,这一过程在细胞清除废物、结构重建、生长发育调节中发挥重要作用.细胞自噬也与肿瘤的存活和死亡等过程密切相关.近年来对细胞自噬的研究有了较大的深入,本文主要对自噬体的形态和发生过程及其分子机制、信号调节通路、自噬研究的检测方法,以及自噬与细胞凋亡和肿瘤发生的关系等方面进行概述,以期较全面地了解细胞自噬作用和最新研究动态.; 李玲徐小洁叶棋浓; 关键词：细胞自噬信号调控细胞凋亡肿瘤

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