国家自然科学基金(31270143)
- 作品数：20 被引量：28H指数：3
- 相关作者：葛菁萍平文祥高冬妮申燕金丽颖更多>>
- 相关机构：黑龙江大学右江民族医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- The effect on fermentation products by engineering Saccharomyces Cerevisiae GY-1,which can express an α-acetolactate decarboxylase gene
- α-Acetolactate decarboxylase has been widely applied in the beer brewing industry due to its influence on flav...
- Fang-Yi PeiShou-Feng HuangYuan GaoJing-Ping Ge
- 构建具有巨细胞病毒(CMV)启动子的杆状病毒高效表达载体并利用其在鸡胚原代细胞中表达eGFP基因被引量：1
- 2013年
- 【目的】杆状病毒载体在哺乳动物细胞中不复制,具有极高的生物安全性,而通过引入细胞特异性启动子、"病毒假型化"、添加不同功能调控元件等优化手段,杆状病毒可转导的细胞类型明显增多、转导效率明显增高。优化的重组杆状病毒可以在鸡细胞中表达,确定重组杆状病毒在鸡细胞中高效表达的条件,为禽类基因工程疫苗的开发奠定了坚实的基础。【方法】本研究以增强型绿色荧光蛋白(Enhanced GreenFluorescent Protein,eGFP)为报告基因,构建含巨细胞病毒(Cytomegaoviyns,CMV)启动子启动的重组转座载体,并且通过病毒假型化(TM/CTD of VSV-GED)、添加转录后调控元件(Woodchuck hepatitis virus post-transcriptional regulatory element,WPRE)和腺病毒反向重复序列(Inverted terminal repeats,ITRs)等手段优化重组杆状病毒表达载体,最终利用重组杆状病毒对鸡胚原代细胞的侵染进行eGFP的表达,比较分析不同重组载体对蛋白表达水平的影响。【结果】eGFP表达结果显示,12 h便可在倒置荧光显微镜下检测出eGFP的表达,随着时间的延长,eGFP表达效率先增加后降低。经过VSVGED病毒假型化的重组杆状病毒转导效率从36%增加至48.2%。添加转录后调控元件WPRE的重组杆状病毒介导eGFP的表达效果与添加10mmol/L丁酸盐法基本相同,但对细胞几乎没有毒性。从72 h内的eGFP表达强度看,只有添加ITRs元件的重组杆状病毒的表达强度随时间的延长而极缓慢增加。【结论】eGFP表达结果显示,利用VSVGED病毒假型化手段可以提高杆状病毒转导鸡胚原代细胞的效率;添加转录后调控元件WPRE的重组杆状病毒介导eGFP的表达效果与添加丁酸盐法基本相同,可以增强杆状病毒介导报告基因在鸡胚原代细胞中的表达水平;添加ITRs元件的重组杆状病毒具有延长eGFP表达时间的作用。
- 宋姗姗葛菁萍李梅高冬妮金丽颖安琦平文祥楼庄伟
- 关键词：杆状病毒调控元件
- 诱变育种提高乳酸乳球菌Lactococcus lactis产Nisin的能力被引量：2
- 2015年
- 为了获得高产细菌素的乳酸乳球菌菌株,通过采用紫外线(UV)、亚硝基胍(NTG)、硫酸二乙酯(DES)诱变和紫外线与硫酸二乙酯复合诱变的方法,获得多株诱变菌株,研究突变株代谢生产Nisin的效价及抑菌能力。结果表明,其中通过诱变得到了一株高产菌株DU101,该菌株代谢生产Nisin的效价由442 IU/m L提高到了1386 IU/m L,约是原始菌株HDBR-06的3.14倍。通过传代试验验证了菌株的遗传性能稳定。
- 葛菁萍孙艳阳李兴霖高冬妮程丹丹宋刚凌宏志平文祥
- 关键词：乳酸乳球菌乳链菌肽诱变育种
- 副干酪乳杆菌prcA基因克隆及生物信息学分析被引量：2
- 2014年
- 旨在了解副干酪乳杆菌prcA基因的结构和功能,探明prcA基因与副干酪乳杆菌拟群体效应相关基因—自诱导肽编码基因之间的联系。通过PCR方法对副干酪乳杆菌中prcA进行扩增,并通过生物信息学方法对该基因的核苷酸组成、蛋白质构象等方面进行预测和分析。克隆得到的prcA基因全长为416 bp,包括一个138 bp的开放阅读框,编码45个氨基酸,蛋白分子量为5326.83 Da,等电点为4.85,是一种稳定蛋白,不含跨膜区,蛋白质的二级结构以α-螺旋、不规则卷曲和延伸主链组成,亚细胞定位预测显示该蛋白主要位于细胞外;prcA基因为副干酪乳杆菌拟群体效应相关基因—自诱导肽编码基因,负责细菌素生成的调控。
- 王洋葛菁萍由田平文祥
- 关键词：副干酪乳杆菌生物信息学
- 鸡白细胞介素2的克隆及其序列分析
- 2017年
- 旨在从分子生物学角度进一步研究鸡免疫刺激因子白细胞介素2(IL-2),探究IL-2蛋白结构。根据GenBank发表的IL-2序列设计引物扩增IL-2基因,将其克隆到p GM-T载体后进行鉴定,鉴定正确的pT-IL-2重组质粒,然后对其进行序列分析。应用生物信息学软件对IL-2序列进行跨膜区、磷酸化位点、氨基酸序列、开放阅读框进行分析和IL-2蛋白的三级结构进行预测。核苷酸序列测定结果表明:IL-2基因片段为430 bp,编码143个氨基酸。生物信息学分析结果表明:本实验获得的IL-2基因编码的蛋白质中含有1个丝氨酸和3个苏氨酸,这可能成为蛋白激酶磷酸化的位点。IL-2蛋白可能在5~28位含有跨膜区。其蛋白二级、三级结构预测结果显示其属于亲水性蛋白,多为α-螺旋、β-转角和N端无规卷曲结构。该结果为IL-2的分子生物学探究奠定了基础。
- 白程乐申艳高冬妮于航平文祥葛菁萍
- 关键词：白细胞介素2基因克隆蛋白结构预测
- CpG ODN B对鸡新城疫重组杆状病毒疫苗的免疫增强效应被引量：3
- 2020年
- 目的:探究CpG ODN作为疫苗佐剂对鸡新城疫重组杆状病毒疫苗的免疫效果。方法:将CpG ODN B/P这2种类型的免疫佐剂分别与鸡新城疫重组杆状病毒载体疫苗BV-BXY-F混合后,以鼻腔免疫方式进行鸡体免疫,并进行攻毒保护实验,通过对鸡体的临床症状观察,以及检测免疫保护率、中和抗体水平、淋巴细胞增殖活性、细胞因子含量,分析各CpG ODN对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响。结果:BV-BXY-F+CpG ODN B免疫组鸡在免疫后42 d中和抗体效价最高,免疫保护率100%,中和抗体效价,sIgA、IgG、IgA、IFN-γ、IL-2、IL-4、CD4^+T细胞、CD8^+T细胞含量较BV-BXY-F+CpG ODN P组分别提高了32.08%、8.44%、13.56%、23.71%、50.20%、132.97%、39.76%、38.43%、25.99%,且差异显著(P<0.05),与单独免疫组BV-BXY-F相比分别提高了13.71%、89.39%、10.41%、21.26%、159.17%、52.71%、237.84%、80.51%、75.57%。结论:CpG ODN B对增强鸡新城疫重组杆状病毒疫苗的免疫增强效果最好。
- 王长丽黄祯雄王胜秋吕进宾晓芸杨睿睿唐华英
- 关键词：P型免疫佐剂
- 不同启动子对HA-VP2重组杆状病毒蛋白表达的影响
- 2017年
- 为比较不同启动子对传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白表达的影响,择优表达体系。本研究将添加了表位附加标记HA-TAG的IBDV-VP2基因整合至含有CMV、CBA和EF1α启动子的重组转移载体中,构建HA-VP2重组杆状病毒,并通过侵染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary,CHO)分析蛋白表达水平,以确定最优启动子。用Gel-Pro analyzer 4.5软件分析Western blotting条带。结果表明,含有CMV、CBA及EF1α启动子的重组杆状病毒所表达的HA-VP2蛋白强度分别为270.61、290.26及83.45,且各启动子活性差异显著(P<0.05),其中CMV与CBA启动子的活性相近能够较高效率地表达HA-VP2蛋白,但EF1α启动子活性较以上2种启动子活性较低。本研究通过比较分析不同启动子对蛋白表达水平的影响,以此择优表达体系,为禽类基因工程疫苗的发展提供新思路。
- 于航高冬妮田兆峰平文祥葛菁萍
- 关键词：VP2杆状病毒表达系统
- Optimization of Fermentation Parameters for Laccase Production by a Novel Deuteromycete Fungus Myrothecium Verrucaria NF-05 Using Response Surface Methodology
- To obtain the maximum production of laccase from a novel deuteromycete fungus Myrothecium verrucaria NF-05, op...
- Dan ZhaoYanyang SunRenpeng DuLi ZhangJingping Ge
- 关键词：LACCASEMEDIUMOPTIMIZATION
- 鸡新城疫病毒F基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2014年
- 研究旨在从分子生物学角度研究新城疫病原F基因,探究NDVF基因的遗传变异情况及其蛋白结构。提取新城疫病毒基因组RNA,根据GenBank中已知的NDVLa Sota株序列设计引物扩增F基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行鉴定,对鉴定正确的重组质粒pMD-NDV-F进行测序分析。应用生物信息学软件对新城疫病毒F基因进行系统进化树分析、氨基酸序列同源性分析、蛋白结构跨膜区分析及F蛋白三级结构的预测。核苷酸序列测定结果表明:F基因为1792 bp,共编码553个氨基酸;生物信息学分析结果表明:F基因在种属间具有较高的保守性,试验获得的F基因与NDV La Sota、Clone30、V4、B1等弱毒株的一致性较高,具有典型的弱毒株特性,F基因的氨基酸序列与新城疫病毒La Sota株F基因的序列同源性最高可达100%;F蛋白的三级结构预测结果显示:F蛋白部分片段与新城疫病毒F蛋白融合片段的相似性为96%。研究为新城疫病毒的分子病毒学研究奠定了基础。
- 安琦申燕原韬刘颖金丽颖高冬妮葛菁萍平文祥
- 关键词：新城疫病毒F基因RT-PCR
- 以具有WPRE调控元件的杆状病毒为载体在鸡胚原代细胞中表达新城疫病毒F基因被引量：1
- 2014年
- 【目的】构建具有哺乳动物细胞特异性启动子和基因转录后调控元件的重组杆状病毒转移载体,优化的重组杆状病毒可介导新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)F基因在鸡原代骨骼肌细胞中进行高效表达。【方法】提取NDV La Sota株病毒RNA基因组,用RT-PCR技术扩增F基因,将其克隆到自主构建的具有转录后调控元件(Woodchuck hepatitis virus post-transcriptional regulatory element,WPRE)的杆状病毒转移载体的CMV启动子下游,通过Bac-to-Bac系统获得F重组Bacmid,经转染Sf9昆虫细胞后获得F重组杆状病毒。重组病毒经扩增后以50个MOI感染鸡原代骨骼肌细胞,接种72 h后裂解细胞收获蛋白。比较分析WPRE调控元件对蛋白表达水平的影响。【结果】经Western blot证实在鸡原代骨骼肌细胞中表达了NDV F蛋白,分子量约56 kDa,与预测蛋白大小一致,且能被NDV阳性血清所识别。添加WPRE转录后调控元件的重组杆状病毒介导F蛋白的表达效果与添加10 mmol/L丁酸盐法基本相同,但对细胞几乎没有毒性。【结论】优化后的重组杆状病毒可以向鸡原代细胞中传递NDV F基因,并在CMV的启动下表达具有反应原性的F蛋白,添加的转录后调控元件WPRE可以增强杆状病毒介导外源基因在鸡原代细胞中的表达水平。本研究为研制NDV及其他重要禽类传染病的杆状病毒载体基因工程疫苗奠定了基础。
- 高冬妮平文祥金丽颖沈万力宋刚唐晓艳安琦申燕葛菁萍
- 关键词：新城疫F基因杆状病毒
