顾敏
- 作品数：47 被引量：180H指数：7
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江苏高校优势学科建设工程资助项目国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>
- 一株鸭源H4N8亚型禽流感病毒的全基因测序及遗传进化分析被引量：8
- 2015年
- 【目的】禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)根据其表面糖蛋白血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸(neuraminidase,NA)的不同,可分为16种HA和9种NA亚型。根据其致病力的差异可分为高致病性禽流感病毒(highly pathogenic avian influenza virus,HPAIV)和低致病性禽流感病毒(low pathogenic avian influenza virus,LPAIV)。虽然H4亚型禽流感病毒为低致病性AIV,感染家禽表现为无症状感染,但其对禽类甚至是哺乳动物是一个潜在的威胁,因此必须要加强对H4亚型禽流感病毒的调查监控。【方法】为了探讨H4亚型禽流感病毒的分子特征及遗传演化规律,对2010年在中国华东地区某活禽市场进行流行病学监测时分离到的一株H4N8亚型禽流感病毒A/duck/Nanjing/1102/2010(简称DK/NJ/1102)进行了全基因组序列测定及遗传进化分析。通过常规的血清学试验确定其HA亚型,提取病毒总RNA,并通过RT-PCR方法分别扩增出其各基因片段,连接p GEM-Teasy载体上后进行序列测定。利用Gen Bank中的BLAST工具进行核苷酸序列的同源性分析,并与Gene Bank中的H4亚型流感病毒及其它相关序列进行遗传进化分析。【结果】DK/NJ/1102的HA基因与Mongolia分离株A/duck/Mongolia/274/2007(H4N3)的核苷酸同源性最高,为98.9%。推导的氨基酸剪切位点序列为"P-E-K-A-S-R-G",符合典型的低致病性禽流感病毒特征;NA基因与华东地区分离的鸭源毒株A/Duck/Eastern China/n91/2009(H3N8)核苷酸同源性最高,达99.4%;PB1、PA和NP基因均与H1亚型禽流感病毒亲缘关系最近;M基因与A/wild duck/Korea/CSM4-12/2009(H5N1)核苷酸同源性最高,高达99.9%;NS基因与韩国2009年分离的H7N7亚型流感病毒遗传距离最近。NS1蛋白的80-84处氨基酸没有发生氨基酸缺失。【结论】该H4N8亚型禽流感病毒基因组构成比较复杂,可能是一株多基因重组病毒。
- 赵晴晴李群辉朱杰钟蕾刘晶晶顾敏王晓泉刘文博刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒遗传进化分析
- 1株H6N6亚型禽流感病毒A/duck/Jiangsu/022/2009的全基因测序及遗传进化分析被引量：7
- 2010年
- 目的对2009年分离自华东地区某活禽交易市场的1株国内未见报道的H6N6亚型禽流感病毒进行了全基因序列的测定,以探讨该病毒各基因片段的可能来源。方法通过常规的血清学试验确定病毒HA亚型,经RT-PCR方法扩增出各基因片段,连接到pGEM-Teasy载体上进行序列测定,利用BLAST进行序列的同源性分析,并结合GenBank中已收录的H6N6亚型流感病毒及其它相关序列进行遗传进化分析。结果 BLAST结果显示该H6N6病毒的HA基因与近年台湾分离株A/duck/Kingmen/E322/2004(H6N2)的核苷酸一致性最高(94.0%),推导的氨基酸剪切位点序列为P-Q-I-E-T-R-G,是典型低致病性禽流感病毒的特征序列;NA基因与华东地区分离株A/duck/EasternChina/160/2002(H4N6)的亲缘关系最近(核苷酸一致性91.0%);而PB1基因与荷兰2003年间分离的H7N7亚型流感病毒关系密切;PA基因则与1999-2000年间意大利分离的H7N1亚型流感病毒亲缘关系较近;NS1蛋白在第218位提前引入终止密码子致使C末端缺失13个氨基酸。结论国内首次分离到的H6N6亚型禽流感病毒的基因组构成较为复杂,但8个基因片段均属于欧亚系,与分离自北美地区的H6N6病毒的遗传距离较远,分别位于不同的进化分支。
- 顾敏宋庆庆李彦芳徐全刚彭大新刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒基因组进化分析H7
- 一株羊源产气荚膜梭菌的分离与鉴定被引量：6
- 2014年
- 2013年4月,扬州大学动物医院畜禽门诊接诊一例山羊急性死亡的病例,对其进行剖检,无菌恒温厌氧分离培养,纯化鉴别,革兰氏染色,生化反应,结果表明为产气荚膜梭菌,并对此进行了一定的讨论。
- 金铎林家琪董真展天松顾敏焦库华王彦红刘文博
- 关键词：产气荚膜梭菌
- 神经氨酸酶、碱性聚合酶2及非结构蛋白1影响A型流感病毒致病力的分子机制研究进展被引量：1
- 2011年
- 随着研究的不断深入,血凝素(HA)之外的其他蛋白在影响A型流感病毒的致病力甚至宿主特异性方面的重要作用逐渐受到关注。本文对神经氨酸酶(NA)、碱性聚合酶2(PB2)及非结构蛋白1(NS1)的相关进展作了综述,以期进一步阐明流感病毒的致病分子基础,并藉此探讨可能的宿主范围限定因素。
- 顾敏彭大新刘秀梵
- 关键词：NANS1致病力宿主范围
- 生物信息学在A型流感病毒研究中的应用被引量：1
- 2011年
- 生物信息学是随着人类基因组计划（Human genome project,HGP）的启动而发展起来的一门新兴学科。1995年,在HGP第一个五年总结报告中,给出了较为完整的定义：生物信息学是一门交叉科学，包含了生物信息的获取、加工、存储、分发、分析、解释等在内的所有方面，它综合运用数学、计算机科学和生物学的各种工具，来阐明和理解大量数据所包含的生物学意义。
- 顾敏曹永忠刘秀梵
- 关键词：生物信息学A型流感病毒人类基因组计划生物学意义
- H4亚型家养水禽流感病毒分离株的表面膜蛋白基因的序列测定和遗传进化分析被引量：5
- 2006年
- 采用常规的血清学试验和特异性RT-PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行4年多的监测,分离鉴定出多株H4亚型禽流感病毒。对其中的A/Duck/Yangzhou/216/2002(简称Dk/YZ/216/02)、A/Duck/Yangzhou/526/2003(简称Dk/YZ/526/03)、A/Duck/Yangzhou/36/2004(简称Dk/YZ/36/04)的血凝素基因和Dk/YZ/526/03、Dk/YZ/36/04的神经氨酸酶基因进行了克隆测序,并与GenBank中收录的其它序列进行了比较,遗传进化结果表明Dk/YZ/216/02的血凝素基因(HA)与毒株Tk/Minnesota/833/80(H4N2)同源性最高,而Dk/YZ/526/03和Dk/YZ/36/04的血凝素基因(HA)均与Budgerigar/Hokkaido/1/77(H4N6)同源性最高;而神经氨酸酶基因(NA)遗传进化分析结果表明Dk/YZ/36/04(H4N6)的NA基因与毒株Pigeon/Nanchang/8-142/2000(H3N6)同源性最高,而Dk/YZ/526/03(H4N2)的NA基因与Dk/Hokkaido/13/00(H9N2)同源性最高,3株禽流感病毒的HA推导的氨基酸剪切位点序列均为P-E-K-A-S-R,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列,与对SPF鸡的致病力试验相吻合。
- 薛峰顾敏彭宜姚春峰张评浒钱忠明刘秀梵
- 关键词：HA剪切位点
- 基于Z曲线的新城疫病毒基因组生物信息分析
- 2010年
- Z曲线是DNA序列信息的一种几何学表示形式。利用Z曲线坐标所对应的生物学含义,可以对DNA序列的生物信息进行系统分析。本文对40株自测序和从GenBank下载的新城疫病毒(NDV)全基因组序列,利用网络提供和自开发的Z曲线分析系统,对NDV生物信息进行了比较分析,构建了NDV全基因组的X、Y、Z分量沿序列的分布曲线和三维Z曲线,比较了不同基因型NDV基因组Z曲线的特征。结果显示,在NDV全基因组中A、G碱基或A、C碱基是占优势的,在基因组的前1/3序列中,G、C含量大于A、T的含量。不同基因型NDV全基因组的Z曲线(从ClassI到ClassII的I-VIII型)有向Z轴靠拢的趋势。
- 曹永忠顾敏刘文博张小荣刘秀梵
- 关键词：新城疫病毒Z曲线分子进化
- 猪流感病毒的进化及其对人类的威胁被引量：6
- 2018年
- 猪流感病毒危害养猪业可持续发展的同时,也对人类健康构成了严重威胁。长期以来,猪被认为是人流感病毒和禽流感病毒的中间宿主并发挥着基因"混合器"的作用,促使猪流感病毒不断进化变异和发生基因重组。历史上的几次流感大流行,尤其是2009年首发于墨西哥的H1N1大流感,与猪流感病毒密切相关。文章从猪流感病毒的基因组进化、猪群中的流行状况及其对人类的潜在威胁等方面进行了简要综述,以期为大流感预警的相关研究提供参考。
- 卜欣欣龙进学顾敏刘秀梵
- 关键词：猪流感病毒混合器基因重组
- 荧光定量RT-PCR检测H5亚型禽流感病毒方法的建立与验证被引量：5
- 2011年
- 根据H5亚型禽流感病毒HA基因上的保守序列,设计合成引物,以H5亚型禽流感病毒HA基因重组质粒为标准品绘制标准曲线,建立了荧光定量逆转录聚合酶链反应检测方法。结果表明,本试验建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.995,灵敏度约为8拷贝/μL,相当于8个AIV颗粒,对新城疫病毒和其他禽病病毒无交叉反应,特异性好、重复性佳,为H5亚型禽流感病毒检测提供了一种特异、敏感、快速、低成本、高通量、生物安全性好的定量检测方法。对178份临床泄殖腔棉拭子样品的检测,该方法结果与经典病毒分离方法符合率大于90.0%,在禽流感病毒临床样品快速筛检、流行病学监测等方面显示了良好的应用前景。
- 曹军平陆桂平徐向明顾敏徐全刚刘武杰彭大新刘秀梵
- 关键词：H5亚型禽流感病毒荧光定量RT-PCR
- 火鸡疱疹病毒FCFC126株gB启动子的克隆与鉴定
- 2017年
- 启动子在重组火鸡疱疹病毒(HVT)载体疫苗中起着至关重要的作用,内源性启动子活性较弱,受载体病毒自身的复制调控。研究通过预测分析HVT(FC126株)囊膜糖蛋白(g B)启动子,将其克隆并与经密码子优化的H7N9亚型禽流感病毒的HA基因构建表达盒质粒,再进一步通过间接免疫荧光试验和荧光定量PCR比较其与外源性强启动子CMV和马立克氏病病毒(MDV,CVI988株)g B启动子的转录表达活性。结果表明:3种启动子均能使目的基因在体外获得转录表达,CMV启动子的活性高于内源性g B启动子,而HVT的g B与MDV的g B表达活性差异不显著。研究结果为重组HVT载体疫苗启动子的选择提供了一定参考。
- 何东昌郝小利刘晶晶杨洁金芳邓永欢徐云鹏程昊徐利军顾敏胡娇王晓泉陈素娟刘晓文甘军纪刘秀梵
- 关键词：启动子克隆活性分析火鸡疱疹病毒
