公共文化服务平台

人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2N端片段的原核表达被引量：6: 2007年; 目的在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)N端片段。方法应用PCR技术从含人MASP2 cDNA的质粒pGEM-MASP2中扩增MASP2-N端基因片段,将其克隆至pGEX4T-1原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP2-N端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与MBL-CLR结合的活性。结果从pGEM-MASP2中扩增得到约840 bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4900 bp和840 bp片段,测序结果与预期的完全一致。纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr 60000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR蛋白结合。结论获得了表达人MASP2 N端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP2N端片段/GST融合蛋白,为MASP2分子的进一步研究提供了条件。; 蔡学敏左大明赵娜张丽芸陈政良; 关键词：N端片段原核表达

Balb/c小鼠MBL-C糖识别域的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1: 2006年; 目的原核表达Balb/c小鼠肝型甘露聚糖结合凝集素(mMBL-C)糖识别域(CRD)并制备其多克隆抗体。方法应用PCR从含Balb/c小鼠MBL-C全长编码区基因的质粒pmMBL-C中扩增目的基因片段,构建重组表达载体,在大肠杆菌中表达。分离纯化表达产物并免疫动物,制备mMBL-C CRD的抗血清,采用ELISA和Western blot鉴定其效价和特异性。结果从pmMBL-C中扩增到约450 bp的DNA片段,构建重组载体pET-CKS-mMBL-C-CRD和pET32a-mMBL-C-CRD,经酶切和测序鉴定,证实重组表达载体构建成功。将其导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物主要以包涵体的形式存在,相对分子质量(Mr)分别为44 000和34 000。利用pET-CKS载体表达产物免疫家兔,分离免疫血清后,使用pET32a(+)载体表达产物进行ELISA及Western blotting,显示多克隆抗体能够与mMBL-C CRD蛋白特异结合。结论获得了重组mMBL-C CRD蛋白及其多克隆抗体,为mMBL-C分子以及CRD的研究奠定了一定的基础。; 左大明张丽芸陈政良; 关键词：甘露聚糖结合凝集素原核表达多克隆抗体天然免疫

中国维吾尔族人群MBL基因启动子及第一外显子区SNP及其单倍型与基因型研究被引量：6: 2007年; 收集新疆维吾尔自治区维吾尔族一般人群血标本,提取白细胞基因组DNA,以序列特异性引物-多聚酶链反应技术检测其甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因启动子区单核苷酸多态性位点-550G/C(称H/L等位基因)、-221C/G(X/Y)、+4C/T(P/Q)和结构基因第一外显子点突变CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA(分别称为D、B、C等位基因,野生型即A等位基因),并分析其单倍型与基因型。发现MBL基因启动子区等位基因主要为L、Y、P,第一外显子等位基因只发现B,未检出C和D;检出5种单倍型,其频率分别是HYPA 0.282、LYPA 0.268、LXPA 0.260、LYPB 0.120、LYQA 0.070。检出12种基因型,其频率分别为HYPA/HYPA 0.183、LXPA/LXPA 0.141、LYPA/LYQA 0.113、LYPA/LYPA 0.112、LYPA/LXPA 0.085、HYPA/LYPA 0.085、LXPA/LYPB 0.085、HYPA/LXPA 0.070、HYPA/LYPB 0.042、LYPA/LYPB 0.028、LYPB/LYQA 0.028、YPB/LYPB 0.028。; 苏黎余新沛张丽芸库热西江.托呼提陈政良; 关键词：甘露聚糖结合凝集素

Balb/C小鼠甘露聚糖结合凝集素-A糖识别域的原核表达被引量：1: 2009年; 目的获取具有生物学活性的Balb/C小鼠血清型甘露聚糖结合凝集素(MBL-A)糖识别域(CRD)蛋白。方法应用PCR从含Balb/C小鼠MBL-A基因的质粒pmMBL-A中扩增目的基因片段,将其克隆至原核表达载体pET41a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达目的蛋白。表达产物(包涵体)经洗涤和复性处理后,利用GST柱纯化,以SDS-PAGE、Westernblotting和ELISA进行分析鉴定。结果从pmMBL-A中扩增到约450bp的DNA片段,构建重组载体pET41a-mMBL-A-CRD,经酶切和测序鉴定后,将其导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物主要以包涵体形式存在,其相对分子质量约47000。包涵体经洗涤及复性处理,GST柱纯化后,融合蛋白的纯度达90%以上。Westernblotting显示重组融合蛋白与抗GST抗体特异性反应,糖结合试验表明表达产物具有生物学活性。结论成功获得了具有生物学活性的Balb/C小鼠MBL-ACRD蛋白,为MBL-A分子的研究奠定了一定基础。; 左大明张丽芸卢晓陈政良; 关键词：甘露聚糖结合凝集素原核表达天然免疫

人CD45基因克隆及其在Hela细胞中的表达: 2015年; 目的克隆人CD45 c DNA并导入Hela细胞中表达,建立研究CD45功能的细胞模型。方法采用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中扩增CD45基因PTPRC的c DNA,将其克隆至p MD-18T载体。构建重组真核表达载体Pc DNA3.1-3xflag-CD45,经HindⅢ和XhoⅠ双酶切及测序验证。将其转染至Hela细胞,以流式细胞术(FCM)和免疫印迹(WB)分析CD45在Hela细胞中的表达情况,碱性磷酸酶试剂盒检测CD45的活性。结果分离到长约3900 bp的人PTPRC c DNA片段,将其插入p MD-18T载体获得了c DNA克隆。酶切和测序结果证实重组表达载体Pc DNA3.1-3xflag-CD45构建成功,FCM和WB分析表明CD45能在Hela细胞中有效表达,且表达的重组CD45蛋白具有生物学活性。结论成功获得人PTPRC c DNA克隆并在Hela细胞中有效表达,为进一步研究CD45功能奠定了基础。; 李捷许天昱吴璐琳张丽芸卢晓左大明陈政良; 关键词：CD45 基因克隆真核表达 HELA细胞

洛阳地区汉族补体B因子主要同种异型遗传多态性分析: 1998年; 应用琼脂糖高压电泳和免疫固定技术，检测了洛阳地区健康汉族成人补体Ｂ因子的多态性。在１１９例无血缘关系个体中，Ｂｆ表型为ＳＳ７７人，ＦＳ３２人，ＦＦ１０人。计算出基因频率分别为ＢＦ＊Ｓ：０．７８１５，ＢＦ＊Ｆ：０．２１８５。与广东等南方汉族人的资料相比，其Ｂｆ遗传多态性分布有显著差异，对此进行了讨论。结果提供了具有地域特点的Ｂｆ多态性资料。; 赖燕来赵红陈仁馨陈立茵陈立茵郭明秋张明军; 关键词：补体 B因子遗传多态性免疫遗传学

小鼠MBL-A基因的克隆和序列分析被引量：3: 2003年; 目的　克隆小鼠甘露聚糖结合凝集素 A(MBL A)基因的全长编码区cDNA。方法　利用RT PCR方法 ,从Balb c小鼠的肝细胞中 ,分离出MBL A基因cDNA片段 ,克隆入pUC T载体 ,测序并进行分析。结果　扩增得到的小鼠MBL A基因cDNA全长 72 0bp ,编码 2 4 0个氨基酸残基 ,包含了完整的富含半胱氨酸区、胶原区、颈区和糖识别域。分析表明 ,与Genbank中发表的序列具有 99.9%的同源性。结论　获得小鼠MBL A基因的克隆 ,为进一步研究MBL; 王宏伟陈政良左大明张丽芸; 关键词：小鼠克隆 RT-PCR 氨基酸

二甲双胍对U937细胞增殖、周期及凋亡的影响被引量：1: 2017年; 目的:探究二甲双胍(metformin)对U937细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法:以U937细胞为研究对象,予不同浓度的二甲双胍处理,分别在24、48和72 h收集细胞。CCK-8法检测细胞增殖情况,流式检测细胞凋亡及细胞周期,并使用Western blot方法检测促凋亡蛋白Bax、抑凋亡蛋白Bcl-2、p-AMPK、p53的表达情况。结果:CCK8结果显示二甲双胍抑制U937的增殖,且呈时间-剂量依赖性。流式结果显示二甲双胍处理后细胞周期停滞在G0/G1期,G0/G1期细胞比例的增加呈时间-剂量依赖性。二甲双胍可诱导细胞凋亡,且凋亡率呈剂量依赖性;二甲双胍浓度为20 mmol/L时,凋亡率呈时间依赖性。Western blot结果显示二甲双胍处理后,p-AMPK、p53、Bax的表达上调,而Bcl-2的表达下调。结论:二甲双胍能抑制U937细胞的增殖,阻滞细胞周期在G0/G1期,诱导细胞凋亡;其机制可能与其上调胞内促凋亡蛋白Bax的表达、下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达、激活AMPK/p53通路有关。; 李君茹李会方周嘉张丽芸卢晓左大明陈政良; 关键词：二甲双胍 U937细胞凋亡

MBL突变体在CHO细胞中表达及其产物分析被引量：4: 2007年; 采用PCR技术,从质粒pMBLm54中获得含GGC54GAC点突变的甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因,将其插入真核表达载体构建重组表达载体pcDNA4/HisMax C-MBLm54,DNA测序验证序列正确后将其电转染入CHO细胞。以Zeocin筛选并维持培养转染后CHO细胞,获得2株稳定高效表达目的蛋白的单克隆细胞株。采用Ni^(2+)-NTA agarose层析柱纯化表达产物,获得54Asp突变MBL蛋白,SDS-PAGE和Western blot分析表明,54Asp突变MBL蛋白主要为相对分子质量为60000的成分,而重组野生型MBL蛋白则主要是相对分子质量为200000和>200000的分子。配体结合试验发现,天然MBL和重组野生型MBL能与甘露聚糖结合,而54Asp则否。结果表明,54Asp突变MBL蛋白不能形成正常的MBL结构单位和寡聚体,并进而影响其配体结合活性。; 赵娜刘凤玲蔡学敏张丽芸陈政良; 关键词：甘露聚糖结合凝集素蛋白活性

口服丙型肝炎复合多表位DNA减毒鼠伤寒沙门活菌苗的实验研究被引量：4: 1999年; 目的　利用减毒鼠伤寒沙门菌作为载体，探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）口服ＤＮＡ疫苗的可行性。方法　把ＨＣＶ复合多表位抗原基因ＰＣＸ克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３（ＣＭＶ启动子），构建ＨＣＶ真核表达载体ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ，转化减毒鼠伤寒沙门菌ＳＬ３２６１，获得ＨＣＶ重组口服ＤＮＡ活菌苗ＳＬ３２６１（ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ），免疫小鼠及家兔后，检测特异性免疫应答及安全性。结果　ＳＬ３２６１（ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ）在小鼠及家兔中均可诱发低水平的特异性体液免疫及细胞免疫应答，免疫动物未见明显的毒性反应。结论　ＨＣＶ口服减毒鼠伤寒沙门菌ＤＮＡ疫苗可诱发特异性的免疫应答，为ＨＣＶ; 黄建生胡幼卿解咏梅许谆张明徽张丽芸陈立茵任大明; 关键词：多表位疫苗

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

张丽芸

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

张丽芸

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈