张萌
- 作品数：5 被引量：26H指数：3
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程医药卫生更多>>
- 信号肽及发酵条件优化促进胶原蛋白在谷氨酸棒杆菌中分泌表达被引量：4
- 2022年
- 胶原蛋白独特的三股螺旋结构,使其具有良好的力学性能和生物相容性,在生物医学材料等方面有广泛应用。利用微生物表达重组胶原蛋白,具有发酵周期短、成本低、便于遗传操作等优点,近些年发展迅速,但分泌带有三股螺旋结构的重组胶原蛋白仍是研究的难点。该研究以来源于化脓性链球菌的胶原蛋白V-B为对象,搭建了谷氨酸棒杆菌分泌表达重组胶原蛋白的平台。在重组胶原蛋白V-B前端引入6种不同信号肽(CspB、PorB、Cg1514、CgR0949、Cg2052或TorA),构建重组表达载体,并转入食品级表达宿主谷氨酸棒状杆菌Corynebacterium glutamicum ATCC 13032中,结果显示PorB信号肽介导的分泌效果最好。此外,对PorB信号肽介导的分泌表达进行培养基、起始诱导菌浓度、诱导时长、IPTG浓度、溶氧的优化,最终胶原域B在摇瓶水平产量达到30 mg/L,是优化前的3倍,并通过圆二色谱表征,验证其正确折叠为三股螺旋。该研究为重组胶原蛋白在谷氨酸棒杆菌中的高效分泌表达奠定了基础。
- 齐静静范炳森张萌许菲
- 关键词：谷氨酸棒杆菌信号肽分泌表达发酵条件优化
- 嗜盐脂肪酶产生菌的筛选及其粗酶性质被引量：16
- 2009年
- 从内蒙古锡林浩特地区盐湖菌种样品分离获得一株嗜盐脂肪酶高产菌，结合生理生化试验和16SrDNA序列分析结果，鉴定并命名为Haloterrigena thermotoleransZ4。该菌最适生长NaCI浓度为3．5mol／L，最高生长温度为60℃，属于嗜盐耐热古生菌。粗酶性质研究表明，金属离子（Ba^2＋、Fe^2＋、Cu^2＋）对酶有激活作用，酶活不同程度的提高了20％～30％；该酶受EDTA的抑制，酶活下降了20％，受PMSF的完全抑制。该酶对NaCl有较高的依赖专一性，至少需要0．5mol／LNaCl维持活性并且高浓度NaCl可以提高其耐热水平。醇类物质对于提高酶的热稳定性有一定作用，丙三醇效果最好。该酶对短链底物对硝基苯酚丁酸酯（p—NPB）的最适水解条件为：pH8．0、70℃、3．5mol／LNaCl：而对长链底物对硝基苯酚十六酸酯协NPP）的最适水解条件为：oH8．0、80℃、2．5mol／LNaCl。
- 张萌张晓梅窦文芳许泓瑜许正宏
- 关键词：嗜盐古生菌酶学性质
- 基于多重计算设计策略提高奇异变形杆菌脂肪酶的热稳定性被引量：4
- 2022年
- 来自奇异变形杆菌的脂肪酶(Proteus mirabilis lipase,PML)具有较好的有机溶剂耐受性,在生产生物柴油等领域有广泛的应用潜力。然而,其热稳定性仍有待提高以更好地适应工业生产。近年来,基于计算机辅助的多种计算设计策略的发展为酶的热稳定性改造提供了更多的思路。文中首先选择了3种基于互补算法的软件ABACUS、PROSS以及FoldX为正筛对PML进行计算设计,选择其两两交集,利用PSSM序列保守性分析和GREMLIN共进化分析两种负筛进一步缩小突变文库,得到18个单点突变设计。经实验验证,有7个T_(m)提高的突变体,其中K208G和G206D的ΔT_(m)最高,分别为3.75℃和3.21℃。选择其中5个酶活高于野生型的突变体利用贪婪累积策略进行组合,最终五点组合突变体M10的T_(m)提高了10.63℃,相对酶活为野生型的140%。组合过程中K208G和G206D展现出了一定的上位性,为M10热稳定性的提高作出了主要贡献。分子动力学模拟表明在突变位点及附近区域有新的作用力产生,G206D/K208G附近作用力的重排可能稳定了对PML稳定性有关键作用的Ca2+结合位点。本研究为天然酶的热稳定性改造提供了高效且兼顾用户友好性的计算设计方案,并为PML的改造及其工业应用的拓展奠定了基础。
- 张碧飞吕成张萌许菲
- 关键词：奇异变形杆菌脂肪酶热稳定性分子动力学模拟
- 表达元件优化促进重组胶原蛋白在谷氨酸棒杆菌中的表达
- 2024年
- 重组胶原蛋白是一种具有广泛应用潜力的生物材料,近年来引起了生物医学、组织工程等众多领域的关注。胶原蛋白的3股螺旋结构赋予其独特的生物学功能和生物相容性,但也增加了其在微生物系统中表达的复杂性。该研究以细菌胶原蛋白V-B作为模式蛋白,通过对表达元件的优化,促进重组胶原蛋白在谷氨酸棒杆菌中的表达。首先通过启动子筛选和发酵时长优化,获得介导V-B表达的最优启动子tac-R0。接着利用RBS calculator设计核糖体结合位点(ribosomal binding site,RBS)和间隔序列(aligned spacing,AS)的突变文库,得到与tac-R0启动子搭配组合的最优RBS和AS,使V-B的产量提高至514 mg/L。此外,通过多基因表达盒的串联组合策略,将多个目的基因串联,最终V-B的产量较初始水平提高了8.4倍,达697 mg/L,该研究为重组胶原蛋白的工业化生产提供了基础。
- 程逸凡张萌许菲
- 关键词：谷氨酸棒杆菌启动子
- 引入非天然氨基酸胶原蛋白表达及交联成键的优化被引量：3
- 2021年
- 微生物重组表达胶原蛋白来源清洁,同时具有序列设计灵活和高产量高纯度等优点,作为生物材料在组织工程等领域具有广泛的应用前景。然而如何促进重组胶原分子交联,使其形成更加稳定的空间结构是设计重组胶原纳米材料需要克服的难点。文中通过双质粒系统将非天然氨基酸O-(2-溴乙基)-酪氨酸引入细菌胶原蛋白序列中,并对其发酵条件进行优化,结果表明在25℃下,以终浓度为0.5mmol/L的IPTG和0.06%的阿拉伯糖诱导24h可以获得高纯度含非天然氨基酸的胶原蛋白。将含非天然氨基酸的胶原蛋白与含半胱氨酸的胶原蛋白在pH为9.0的NH4HCO3缓冲液中进行交联,形成了最大分子粒径可达1μm的聚集体,为重组胶原蛋白生物材料的设计提供了新思路。
- 侯亚茹张萌许菲
- 关键词：非天然氨基酸
