王令春 作品数:42 被引量:69 H指数:5 供职机构: 军事医学科学院生物工程研究所 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家科技重大专项 艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 环境科学与工程 农业科学 更多>>
重组人白细胞介素-2的研制 1996年 白细胞介素-2(Inter leukin2,IL-2)是由辅助性T淋巴细胞产生的一种淋巴因子,它作为一种免疫活性物质通过对杀伤细胞的诱导、扩增和分化等介导机体免疫系统,具有抗肿瘤、抗病毒和抗感染等作用。临床资料显示它用在诸如黑色素瘤、肾癌等恶性肿瘤的治疗,已取得了较好的效果。 马清钧 单传伟 边疆 王令春 王令春 刘新垣 徐桂清 虞建良 刘新垣关键词:重组人白细胞介素 杀伤细胞 黑色素瘤 免疫活性物质 淋巴因子 Cre-LoxP系统在炭疽芽胞杆菌基因敲除中的应用及eag基因的敲除 被引量:4 2009年 将Cre-LoxP系统应用于Bacillus anthracis中并成功敲除eag基因.以B.anthracis基因组为模板扩增得到上下游同源臂,联合两端带有LoxP位点的壮观霉素抗性基因片段构建好同源重组载体,转化B.anthracisAP422,通过一系列筛选得到带有抗性标记的重组菌.然后,通过转入Cre重组酶表达质粒,去除抗性标记,得到eag基因缺失的重组菌,并在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行了系统的鉴定.最终建立了Cre-LoxP系统在B.anthracis中的应用方法,并成功敲除eag基因. 王艳春 姜娜 展德文 邱炎 袁盛凌 陶好霞 王令春 张兆山 刘纯杰关键词:炭疽芽胞杆菌 同源重组 基因敲除 肠毒素大肠杆菌攻毒小鼠模型的建立以及疫苗候选株保护效果的评价 被引量:5 2006年 目的:建立肠毒素大肠杆菌攻毒小鼠模型以及应用模型对疫苗候选株免疫效果进行评价.方法:通过鼻饲半数致死量(LD50)肠毒素大肠杆菌E44813,E44815和E11881A观察小鼠肺病理学变化、肺部细菌清除情况变化,建立肠毒素大肠杆菌鼻饲小鼠模型;应用鼻饲小鼠模型观察疫苗候选株FE1,FE3,FE6保护效果.结果:鼻饲LD50剂量肠毒素大肠杆菌小鼠的病理特征是肺组织存在大量的淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和浆细胞,为多病灶支气管肺炎,肺部细菌清除缓慢,至第7天仍能检测到105数量级的细菌.应用疫苗候选株免疫后进行攻毒,小鼠没有发病和死亡,病理特征主要是淋巴细胞少量增多,肺部细菌清除迅速,至第7天已检测不到细菌,与对照有显著性差异(0 CFU/g vs 6.2×105,5.4×105,2.3×105 CFU/g,P<0.05).结论:肠毒素大肠杆菌鼻饲小鼠模型能够为疫苗筛选和评价提供了有效途径,同时也证实了疫苗候选株FE1,FE3,FE6具有良好的免疫保护效果. 王志斌 姜普林 曾年华 李淑琴 王令春 李燕 熊仕秋 张兆山关键词:小鼠模型 能在芽孢表面展示PA<Sub>20</Sub>蛋白的炭疽芽孢杆菌及其应用 本发明公开了一株能在芽胞表面展示PA<Sub>20</Sub>蛋白的炭疽杆菌株及其应用。该菌株,是将pagA<Sub>20</Sub>基因插入到炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)芽胞蛋白bclA基因未端... 展德文 王艳春 刘纯杰 陶好霞 袁盛凌 王令春 王芃炭疽芽孢杆菌保护性抗原在大肠杆菌中的表达及纯化 2005年 按照炭疽芽孢杆菌保护性抗原(PA)基因成熟肽编码序列设计引物,从炭疽杆菌pOX1质粒中扩增出PA基因片段,将该片段定向插入到原核表达载体pET-28a中,获得了pET-PA原核表达重组质粒,限制性酶切分析和DNA序列测定均证实该克隆插入片段为PA基因的成熟肽编码序列。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白在大肠杆菌表达系统中获得了高效表达;Western印迹分析表明表达产物具有良好的免疫学活性。 展德文 刘向昕 陶好霞 王令春 张兆山关键词:炭疽杆菌 保护性抗原 一种预防和/或治疗幽门螺杆菌感染的疫苗 本发明公开了一种预防和/或治疗幽门螺杆菌感染的疫苗。该疫苗的活性成分为HP0762蛋白,所述HP0762蛋白的氨基酸序列如GenBank AccessionNo.ACM46115.1所示。首先通过反向疫苗学的方法从幽门螺... 刘纯杰 王涛 陶好霞 王令春 袁盛凌 展德文 王芃 王艳春谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇的气相色谱分析 被引量:7 1989年 本文建立了同时测定谷物中二种单端孢霉烯族毒索——DON和NIV的简便、灵敏的气相色谱方法.谷物用水打湿后,用氯仿-乙醇(8:2)提取,提取液旋转蒸发至干,残渣溶于丙酮中,经三甲基硅基咪唑衍生化后,用气相色谱外标法进行定量. 胡绪英 王令春 曹金鸿关键词:赤霉病 谷物 DON NIV 气相色谱 KBMA炭疽杆菌疫苗的研制 炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)是一种能形成芽孢的革兰氏阳性菌,它引起的炭疽病是一种重要的人畜共患传染病。炭疽杆菌可通过皮肤、呼吸道、胃肠道三种方式侵害人类,严重影响人类的健康。目前我国主要使用减毒活... 沈非 袁盛凌 展德文 王艳春 任敏 陶好霞 王芃 王令春 刘纯杰关键词:炭疽芽胞杆菌 炭疽杆菌S层蛋白SLH结构域多抗的制备及其在S层蛋白表达分析中的应用 目的原核表达炭疽杆菌S层蛋白EA1的保守结构域SLH结构域,并制备该蛋白的多克隆抗体分析多个炭疽杆菌突变株S层蛋白表达情况。方法从炭疽杆菌A16R中经PCR扩增得到S层蛋白EA1的保守结构域SLH结构域编码序列,将其克隆... 陶好霞 王艳春 袁盛凌 王芃 王令春 张兆山 刘纯杰关键词:炭疽杆菌 原核表达 多克隆抗体 幽门螺杆菌CagA蛋白N端片段的表达、纯化及其与磷脂酰丝氨酸的亲和力检测 被引量:1 2011年 目的:表达和纯化幽门螺杆菌不同菌株的CagA蛋白N端片段,检测其与磷脂酰丝氨酸(PS)的相互作用及亲和力。方法:用PCR方法从幽门螺杆菌3个菌株中扩增出CagA蛋白N端基因,并连接到表达载体pET-28a上;转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导可溶性表达CagA蛋白N端880残基片段;经镍柱亲和纯化后,利用PLOA法检测CagA蛋白与PS的相互作用。结果:构建了3种幽门螺杆菌菌株cagA基因的原核表达质粒pET-28a/cagAJ99、pET-28a/cagA11637及pET-28a/cagASS1,并在大肠杆菌中获得可溶性表达,SDS-PAGE和Western印迹证实得到目标融合蛋白,亲和纯化得到高纯度CagA蛋白。PLOA结果表明,CagA蛋白与PS有明显的相互作用。结论:3种幽门螺杆菌菌株CagA蛋白与PS之间存在相互作用,且不同的CagA与PS有不同的亲和力。 管张燕 王芃 陶好霞 袁盛凌 王艳春 申严杰 王令春 刘纯杰关键词:幽门螺杆菌 CAGA蛋白 磷脂酰丝氨酸 原核表达 纯化