房艳华
- 作品数：3 被引量：10H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学资源环境学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 饲用优良乳酸菌鉴定及生物学特性研究被引量：9
- 2017年
- 对9株供试乳酸菌产酸产气、生长速率、产酸速率等方面筛选既能用于微生态制剂又能用于青贮饲料发酵剂的优良乳酸菌;并从细菌形态学、生理生化特征和16SrDNA基因序列分析对其进行鉴定;同时进一步研究乳酸菌对温度、盐浓度和强酸强碱的耐受性、有机酸组分和药物敏感性等生物学特性。试验筛选出植物乳杆菌R02(Lactobacillus plantarum)、粪肠球菌R07(Enterococcus faecalis)和戊糖片球菌R09(Pediococcus pentosaceus)3株优良乳酸菌。其中菌株R09生长最快,产酸能力最强,乳酸占总酸含量最高,达95.45%,可耐受0.12g/mL NaCl;R02对温度的耐受性最强,可耐受55℃高温;R07对强酸强碱环境有较强的耐受能力,在pH为3.0~9.5的条件下均可生长。菌株R02、R07、R09均具有生长快、产酸和耐受能力强的优良生物学特性,因此具有应用于微生态制剂和青贮饲料的潜能。
- 李肖李海洋房艳华来航线韦小敏娄义
- 关键词：青贮饲料微生态制剂乳酸菌药敏性
- 斜卧青霉转录调控蛋白Hac1染色质免疫共沉淀分析方法的建立被引量：1
- 2018年
- 【目的】对斜卧青霉转录调控因子Hac1进行染色质免疫共沉淀(CHIP)试验,为其调控机制及生物学功能研究奠定基础。【方法】以斜卧青霉为材料,DTT诱导转录调控因子Hac1表达,用交联Buffer处理菌丝,使Hac1与靶基因交联,超声破碎染色质后,进行解交联染色体检验,研究不同交联时间(5,10,20,30,40min)、不同菌丝用量(10mL CHIP缓冲液中分别添加0.25,0.50,1.00,1.50g菌丝)及不同超声功率(15,20,25,30 W)、超声时间(1,3,5s)、超声间隔时间(10,20,30,40s)、超声次数(15,25,30,40次)对试验效果的影响。在优化的条件下对菌丝进行处理,获得合格的DNA片段,进行CHIP试验,采用随机PCR方法检测染色质免疫共沉淀效果。【结果】适用于斜卧青霉Hac1的最佳染色质免疫共沉淀试验的条件为:交联时间控制在20min以内;最佳菌丝用量为10mL CHIP缓冲液中加入1g菌丝;25 W超声功率,工作时间5s,间隔时间40s,超声30次。在优化的条件下富集DNA片段,进行随机PCR,结果在500~750bp间可见明显的扩增条带。【结论】优化了斜卧青霉转录调控因子Hac1CHIP条件,成功进行了CHIP试验。
- 房艳华韦小敏李肖来航线马小娟
- 关键词：斜卧青霉交联
- 斜卧青霉转录调控蛋白Hac1过表达菌株的构建
- 2016年
- 【目的】以增强型绿色荧光蛋白为报告基因,构建斜卧青霉转录调控蛋白Hac1激活形式基因（Hac1^i）随机插入过表达菌株和非激活形式基因（Hac1u）原位插入过表达菌株,并初步观察Hac1基因的2种不同编码蛋白在菌丝内部的运动情况,为进一步研究转录调控蛋白Hac1的功能奠定基础。【方法】分别克隆ptrA筛选标记、gpdA启动子、Hac1^i编码区、eGFP编码区及终止子,利用融合PCR融合克隆片段,构建Hac1^i随机插入表达盒;再分别克隆Hac1上游臂及编码区、eGFP编码区及终止子、ptrA筛选标记、Hac1下游臂序列,融合克隆片段,构建Hac1u原位插入表达盒。将2种表达盒分别转化斜卧青霉原生质体,通过吡啶硫胺素筛选标记、PCR扩增等检测获得阳性转化子,荧光显微镜观察融合蛋白的表达及运动情况。【结果】成功构建了Hac1^i基因随机插入表达盒和Hac1u基因原位插入表达盒,利用原生质体转化将2种表达盒转入宿主斜卧青霉菌株,经PCR初步验证,得到了阳性转化子。阳性转化子在麸皮培养基上培养2-4d后,可在菌丝内部清晰观察到强烈的绿色荧光信号,表明融合蛋白在菌丝体内得到了正确表达。【结论】成功构建了Hac1^i基因随机插入和Hac1u基因原位插入菌株。
- 马小娟韦小敏来航线房艳华胡轶伦
- 关键词：斜卧青霉荧光蛋白
